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        液體發酵系統

        一、液體發酵系統技術指標

        具有溫度、轉速、氧氣流量、空氣流量、pH 、DO 、補料、消泡顯示及控制功能,并配有機械消泡漿。

        1、溫度:自動控制范圍:自來水溫+5℃~ 50℃﹙±0.2 ℃ ﹚顯示范圍:0 ~150 ℃

        2、攪拌轉速:調速范圍50 ~1000±5rpm

        3、空氣流量:顯示控制范圍0 ~ 10L/min

        4、pH顯示控制:2 ~12pH±0.05﹙酸堿雙向﹚

        5、溶解氧:0 ~150±2℅

        6、補料、消泡蠕動泵各一臺

        7、罐體總容積10L,設計壓力2.0kg/c㎡、最高工作壓力2.0kg/c㎡,設計工作溫度131 ℃

        8、滅菌方法:手動控制蒸汽消毒滅菌

        9、功率:主機:3kw, 單相220v

        10、氣源:2 ~4kg/c㎡

        11、蒸汽: 2 ~4kg/c㎡

        二、管路說明

        該流程圖中空氣管路閥門的標號為“AXX”,蒸汽管路閥門的標號為“SXX”,冷卻水管路閥門標號為“WXX”,冷凝水管路閥門標號為“VXX”,電磁閥標號為“CXX”,物料管路閥門標號為“PXX”,冷凍水管路標號為“CWX”,其它氣體管路標號為“NXX”。

        1、空氣及其凈化

        來自空氣壓縮機的壓縮空氣經凈化器(外接減壓穩定器、除水、除塵、空氣予過濾器)進入發酵罐空氣總管,空氣流量計針閥A01、閥A02、單向閥、空氣過濾器,閥A03到達反應器內,尾氣經閥VT1排出,本管路具有計量,凈化作用。注:空氣流量顯示的流量是以過濾器前的壓力下的流量,不是標準狀態下的流量。

        2、蒸汽

        2.1 蒸汽進夾套

        蒸汽經閥S01進入夾套(上進),經閥V01排出冷凝水。蒸汽對培養基預熱。

        2.2 蒸氣進反應器

        蒸汽經閥S02、單向閥、空氣過濾器、閥A03進入罐內,由排氣口控制閥VT1排出。蒸汽對過濾器及空氣管線消毒。

        2.3 蒸汽進取樣閥及放料閥

        蒸汽經閥S03進入取樣閥,出閥P02排出冷凝水。

        3、自來水

        3.1 自來水進夾套

        當電磁閥C01打開時,自來水經自動注水閥、閥W01進入發應器夾套(下進),由夾套上口、閥W02、加熱器、電磁閥C01排出;當電磁閥關閉時,夾套水經W02進入電加熱器、循環泵、單向閥進入夾套(下口),通過夾水套水的循環,將加熱器的熱能帶入夾套,通過夾套的換熱加熱發酵液。特別提示:溫度自動前必須對夾套注水。

        3.2 自來水進排氣冷凝器,自來水經閥W03進入排氣冷凝器,對發酵尾氣進行冷卻盡可能減少培養基的水分蒸發

        4、冷卻水(選配)(消毒后降溫應優先使用 自來水)

        冷凍水經電磁閥C02進入加熱器內盤管,對夾套循環水進行冷卻。

        冷凍水經切換閥T02(關T01)進入自來水管線、經切換閥T04(關T03)返回冷凍水回路。

        5、純氧管線(選配)

        純氧管線:純氧進入流量計、電磁閥C03、切斷閥A21進入空氣過濾器。

        純氧流量調節:開C03、A21后調節流量計的調節手柄。

        6、空氣流量檢測與控制:

        空氣熱質量流量計:與空氣玻璃轉子流量計并聯安裝且在熱質量流量計前后安裝切斷閥。熱質量流量計內通道必須保持干燥無塵,因此只有在發酵過程中才開質量流量計的前后切斷閥A11、A12,發酵結束后應及時關閉A11、A12。(詳細說明見熱質量流量計的說明書)

        7、補氨水管線

        氨水經電磁閥C04、切斷閥A31、補料針進入發酵罐,電磁閥由控制器控制。

        三、實罐滅菌操作

        1、準備

        1.1. 蓋緊罐蓋上各種罐蓋,旋緊罐蓋上壓緊螺栓。

        1.2. 標定pH、DO電極,將電極插入罐體側面的傳感器口并及時地鎖緊螺母,確保安裝妥當防止高壓下傳感器彈出傷人。

        1.3. 關緊發酵罐底閥P01,倒入培養基,調整PH值,旋緊接種口

        注:氯離子對不銹鋼會帶來不可逆轉的破壞,因此應避免用鹽酸溶液調節PH,如工藝上無法避免用鹽酸,應控制鹽酸濃度不大于5 ℅且在添加過程中不得直接接觸不銹鋼。

        1.4. 關排氣冷凝器進水W03,移去進出口的軟管排盡冷凝水夾套中水

        1.5.提起過濾器使過濾器后的三通閥A03處于“S”位置。(S—消毒,F—發酵),

        2、培養基預熱

        2.1 準備工作

        預熱啟動蒸汽發生器及空氣壓縮機。

        將控制器中的溫度控制設定為手動。

        開排氣閥VT1,關閉其它所有閥門。

        2.2 開排氣閥VT1 ,開夾套冷凝水閥V01排夾套水,關閉其它閥門

        2.3 啟動反應器攪拌馬達。調轉速200 ~ 300Rpm

        2.4 蒸汽進夾套:緩緩開夾套蒸汽閥S01蒸汽進夾套(注意:此時有輕微爆破聲屬正常,如聲音過響則開閥的速度應減慢)。待排水總口排出蒸汽時調節冷凝水閥V01,控制蒸氣排出量以有少量蒸汽排出即可。并控制夾套內壓力不超過0.2Mpa。當培養基預熱至98 ℃時,進入實罐滅菌操作,在培養基溫度在80 ~ 90 ℃時可以適當的減慢升溫速度,在本溫度區域可以殺滅大部分的微生物。

        2.5 蒸汽進取樣閥:開出料閥P02(關緊底閥P01),開蒸汽閥S03,蒸氣進入取樣閥內腔,當閥P02排盡冷凝水后應調節其開度,以少量蒸汽排出即可。

        3、實罐滅菌

        3.1 過濾器消毒:(A或B任選一種,首次消毒或每五批用“A”種消毒,其余可用“B”種消毒)

        A:外源蒸汽消過濾器:微開過濾器上排冷凝水閥V02、V12,開過濾器前蒸汽閥S02,蒸汽經過濾器進入反應器,當冷凝水閥V02、V12出口冷凝水很少時,調節冷凝水閥以有少量蒸汽排出為宜。當排氣口有蒸汽排出或罐溫達到100 ℃兩分鐘后,關閉排氣閥VT1。調節蒸汽閥S02 ,維持過濾器前蒸汽壓為0.12 ~0.16Mpa。當罐溫達到100 ℃時,培養基中的溶氧接近零??梢詷硕ㄈ苎醯牧泓c。

        B:罐內蒸汽消過濾器:過濾器三通閥處于“S”位置。停攪拌,微開過濾器上排冷凝水閥V02、V12,當有罐壓時,罐內蒸汽經空氣管罐內三通閥進入過濾器,進V02、V12排出冷凝水。當排氣口有蒸汽排出或罐溫達到100 ℃兩分鐘后,關閉排氣閥VT1。調節冷凝水閥V02、V12以有少量蒸汽排出為宜。當罐溫達到100 ℃時,培養基中的溶氧接近零,可以標定溶氧為零點。如果升溫速度比較慢可以開罐底閥P01,蒸汽進入發酵罐。

        3.2 當達到預定溫度或罐壓,開排氣閥VT1至有少量蒸汽排出,關緊或微開夾套蒸汽閥S01,微開罐底閥P01(開閥時觀察視鏡處培養基翻動的變化,以有少量的變化為亦),根據罐壓 或罐溫變化的趨勢,及時調整蒸汽閥S02、S03。閥門調節宜微調應避免大幅度開關。當反應器罐壓或罐溫維持在預定的范圍內開始計時。

        3.3 保溫開始后,排氣閥蒸氣排量不宜太小,否則可能導致液面以上的罐體部分尤其罐蓋達不到消毒溫度。

        3.4 保溫階段應旋松接種口蓋至有少量蒸氣冒出。

        3.5 移種管線消毒(適用于多級發酵)

        在保溫過程中開移種管線閥P03及受種閥前排水閥V04,保溫結束前關V03。

        4、滅菌完成及降溫(先開后關,后開先關)

        4.1 保溫結束首先旋緊接種口蓋.旋緊罐底閥P01,再關緊取樣器的蒸汽閥S03。抬起過濾器使三通閥A03處于S位置,關緊蒸汽閥S02,調節過濾器冷凝水閥以有微量排氣為宜。

        4.2  關夾套蒸汽閥S01、冷凝水閥V01,開夾套進水閥W01和循環管線切斷閥W02.在控制器中將溫度控制方式設定為“自動”并對溫度進行設定,發酵罐進入自動降溫。按下攪拌開關,設定攪拌轉速并“自動”控制。

        4.3  當罐壓接近0.05Mpa時關閥V02,緩緩開空氣管線A01、A02,空氣進入發酵罐,當過濾器冷凝水閥V02排盡冷凝水后就可以關閉。

        注:當罐壓穩定后可以將三通閥A03放回“F”位置。

        4.4 在降溫過程中,始終監視罐壓,嚴禁壓力掉零。當溫度達到工藝要求時,調節攪拌轉速、空氣流量、罐壓、標定溶氧電極斜率及校正pH電極的零點。

        注意:

        1、如另配冷凍水系統消毒后降溫請選擇自來水降溫(控制箱左側板N2開關撥向“W”

        2、滅菌完畢,請勿關閉蒸氣發生器,取樣時需要用蒸汽

        四、發酵操作

        1、準備

        1.1  溶氧電極標定:將三通閥放回“F”位置,調節空氣流量、罐壓、攪拌轉速、罐溫(為保證工藝參數的可比性,建議上面四參數維持一個固定值),標定溶氧電極斜率為100%

        1.2  pH電極零點校正:高溫消毒后pH電極的零點或多或少都會發生漂移,應預校正。取樣應用外源pH電極精確測定培養基的pH值,根據精確測定值與在線的pH值的差值在標定菜單中直接修改零點,使在線值等同于精確測定值。

        2、接種

        2.1 搖瓶倒種:調節進氣量至0.2VVM,開排氣閥VT1至罐壓接近零(不得大于0.02Mpa),予先旋松接種口,在接種口放好火焰圈并點燃(在火焰圈中放少量棉花可以助燃提高火焰的高度),打開接種口,倒入種子,然后旋緊接種蓋,立即調高罐壓。

        2.2 差壓接種:移種管線消毒:檢查受種閥P04并關緊,開冷凝水閥V04,開種子罐出料閥P02,開移種管線蒸汽閥S03,開移種管線切斷閥P03,當閥P01、V04處冷凝水排盡后調節閥P02、V04以有少量水蒸氣排出為宜。消毒30分鐘后,關緊閥P02、V04,關緊蒸汽閥S03并立即開受種閥P04,用發酵罐中的空氣對移種管線進行保壓,等移種管線冷卻后就可以移種。

        差壓移種:調整種子罐與發酵罐的壓力,維持種子罐罐壓大于發酵罐罐壓約0.05Mpa,開種子罐底閥P01,種液進入發酵罐。移種結束必須立即關緊受種閥P04,并調高發酵罐罐壓。移種管線清洗時應避免移種管線中的水壓高于發酵罐罐壓,以免因受種閥泄露導致發酵液被污染。

        2.3 發酵初始化:在控制器的發酵罐狀態畫面輸入“發酵批號”再按“就緒”或“開始”并“確認”,發酵罐數據才能自動保存。設定發酵罐控制參數及適宜的控制模式。

        3、補料

        3.1 將經滅菌消毒的補料瓶及輸液瓶放置于擱架上,用手動方式轉動蠕動泵泵頭,將輸液管沿蠕動泵轉動方向潛入蠕動泵內。并用蠕動泵殼內的夾子夾緊軟管。

        3.2 旋下補料口上悶頭,用酒精棉球對補料口內橡膠塞外表面消毒,然后將針頭插入并穿透密封蓋,并用補料針上的螺母鎖緊。

        3.3 打開蠕動泵手動開關,使輸液管中充滿料液。置蠕動泵開關于自動狀態。根據發酵工業要求設計控制方式及控制周期和脈沖。

        3.4 酸堿液、消泡劑操作同補料操作。補料方式有多種,應根據工藝要求選擇恰當的補料方式。

        4、取樣

        4.1 取樣器消毒:半開閥P02,開蒸汽閥S03,,蒸氣進入取樣器,消毒時間5—10分鐘

        4.2 關閉蒸氣閥S03,全開出料閥P02,準備取樣。

        4.3 逆時針轉動取樣閥P01手柄,進行取樣?;剞D手柄,取樣結束。

        4.4 開蒸汽閥S03,沖洗取樣器,關閥S03。取樣結束。

        5、發酵前設計發酵參數(略,詳見發酵罐說明書第五章)

        6、放料:發酵結束時務必將空氣管線三通閥A03置于“S”位置。放料是通過取樣口放料,轉動手柄開取樣閥即可放料若需收集無菌料操作同取樣操作。

        7、發酵結束:發酵結束后必須在控制器上對發酵狀態修改,確認發酵結束,發酵數據記錄將自動整理并保存并將各控制參數控制方式改為手動。

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