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        《現代儀器分析》教學大綱

        課程代碼:BB035318                              學時:45           學分:2.5

        理論學時:27                                    實驗或討論學時:18

        適用專業:生物技術                              課程性質:必修

        執筆人:聶永心                                  審定人:朱常香

        一、說明

        1.課程的性質、地位和任務

        現代儀器分析是根據物質的物理和化學等性質來獲得物質的組成、含量、結構以及相關的信息的分析方法。本課程的主要包括儀器分析方法的分類、生物電鏡技術、離心和電泳技術、紫外可見吸收光譜法、色譜分析法導論、氣相色譜分析法、液相色譜分析法和質譜法等內容,重點闡述各種儀器分析方法的基本原理、分析儀器的基本構造、應用對象及分析過程。由于儀器分析是一門人們賴以獲得物質的化學組成和結構及有關信息的科學,而這些信息對于生命科學、材料科學、環境科學和能源科學等都是必不可少的,因此儀器分析常被稱為科學技術的“眼睛”,是進行科學研究的基礎。

        2.課程教學的基本要求

        通過本課程的學習,要求學生掌握相關基本理論、基礎知識和基本操作技能,掌握基本的儀器分析方法及分析數據的處理手段,經過系統地必要理論和操作技能的訓練,培養學生嚴謹、細致、實事求是的科學作風,養成分析工作整潔、有序、珍惜儀器設備的良好實驗習慣,培養學生具有分析問題、解決問題的初步能力。實驗課教學作為一門課程,單獨開設。

        3.課程教學改革

        從講課內容上,結合重點實驗室的儀器情況,刪掉了與生物技術專業關系不太密切的原子發射光譜法的內容,增加了生物電鏡技術、質譜法等內容,授課是提綱結領式的,以少而精為原則,突出重點兼顧一般,防止偏多、偏深,并努力培養學生的自學能力,引導學生讀懂教科書,鼓勵學生去看參考書和增強利用學到的知識去解決實際問題的興趣。

        二、教學大綱內容

        (一)課程理論教學

        第一講  現代儀器分析的發展、分類和分析儀器的組成

        教學內容:儀器分析和化學分析的關系,分析化學的發展過程。儀器分析的分類,一般按最后分析過程所觀測的性質分類。通常包括:電化學分析法、光學分析法、色譜分析法、其他儀器分析法。儀器分析的特點。分析儀器的組成。

        教學重點和難點:儀器分析的分類,分析儀器的組成。

        建議教學方法:多媒體課堂講授為主

        思考題:

        1、分析化學發展的過程。

        2、儀器分析的分類、特點。

        3、分析儀器主要有哪幾部分組成?

        需開設的實驗項目名稱:無

        第二講  生物電鏡技術

        教學內容:電鏡的基礎知識:光鏡的分辨極限,電鏡的理論基礎,電子與固體樣品的相互作用。透射電鏡的結構、原理和使用:透射電鏡的結構,透射電鏡的成像原理,透射電鏡的使用與調整。掃描電鏡的結構、原理和使用:掃描電鏡的結構,掃描電鏡的工作原理,掃描電鏡的使用,掃描透射電鏡。超薄切片技術:載網和支持膜,超薄切片的制作。負染色技術:負染的原理,負染樣品的制備,負染色液,負染的操作方法,負染色中應注意的問題。掃描電鏡的生物樣品制備技術:掃描電鏡樣品制備的基本方法,樣品的制備與觀察。

        教學重點和難點:電鏡的理論基礎,透射電鏡的基本結構,透射電鏡的成像原理;掃描電鏡的結構,掃描電鏡的工作原理;超薄切片技術,負染色技術,臨界點干燥技術。

        建議教學方法:課堂講授與演示教學

        思考題:

        1、透射電鏡的基本原理及結構。

        2、簡述透射電鏡超薄切片制備的主要過程。

        3、掃描電鏡與透射電鏡的主要異同點。

        4、掃描電子顯微鏡生物樣品制備的過程。

        需開設的實驗項目:電鏡的結構、制樣技術及操作

        第三講  離心與電泳技術

        教學內容:g值和s值的物理意義,g值是某轉頭所產生的最大離心力場是重力場的多少倍;s值單位離心力場下的沉降速度。制備離心法可分為差速離心法和密度梯度離心法兩類操作方法。差速離心的原理。差速離心的局限性。梯度離心的概念。梯度離心的優點。梯度離心包括兩種方法速度梯度離心和等密度梯度離心,梯度液的選擇的選擇條件,常用梯度材料及其性質。電泳的基本原理。遷移率的定義,影響荷電分子遷移率的因素。常用電泳支持介質。各類凝膠電泳方法的原理。

        教學重點和難點:g值和s值的物理意義,差速離心和梯度離心的原理、異同,遷移率的定義,影響遷移率的因素,各類凝膠電泳方法的原理。

        建議教學方法:多媒體教學

        思考題:

        1、相對離心力場(g)和沉降系數(S)的物理意義。

        2、梯度離心的原理、優點和梯度材料選擇的條件。

        3、常見凝膠電泳方法的原理。

        需開設的實驗項目:離心機的結構及使用

        第四講  光學分析法

        教學內容:光與物質的作用方式;光學分析法的分類;光譜法儀器的組成。紫外-可見吸收光譜的產生,分子吸收光譜的形成;有機化合物的紫外-可見吸收光譜:電子躍遷類型,共軛作用,溶液對吸收光譜的影響,生色團、助色團、紅移或藍移的概念;朗伯-比爾(Lambert-Beer定律的內容,引起偏離比爾定律的因素。紫外-可見分光光度計的組成,單色器的組成及工作過程;紫外-可見分光光度計的分類及特點;分光光度計的校正,測量條件地選擇;常用的定量分析方法。原子吸收光譜法的發展,原子吸收分光光度法與紫外-可見分光光度法的比較,原子吸收光譜分析的基本過程。原子吸收分光光度法的基本原理:原子吸收線(原子吸收線的產生、吸收線的輪廓與變寬),基態原子數與原子化溫度的關系(與發射光譜法比較),峰值吸收測量法。原子吸收光譜儀器:銳線光源、原子化器(火焰原子化器、石墨爐原子化器),分光系統、檢測系統,原子吸收分光光度計的類型。原子吸收光譜法的干擾和抑制:物理干擾及其抑制,化學干擾及其抑制,電離干擾及其抑制,光譜干擾及其抑制。原子吸收光譜定量分析:標準曲線法,標準加入法;原子吸收光譜法的應用。

        教學重點和難點:化合物電子光譜的產生,紫外分光光度計的基本部件,分光光度計主要類型和構造原理,紫外-可見分子吸收光譜法的應用。原子吸收分光光度法的基本原理;原子吸收分光光度計的基本組成及各部分的作用;原子吸收的定量分析方法。

        建議教學方法:多媒體教學與課堂討論

        思考題:

        1、紫外-可見吸收光譜的產生過程。

        2、紫外-可見分光光度計的結構組成及分類。

        3、單色器的結構組成及其分光過程。

        4、紫外-可見分子吸收光譜法的應用。

        5、原子吸收分光光度法的基本原理

        6、原子吸收分光光度計的基本組成及各部分的作用

        需開設的實驗項目:紫外分光光度法繪制Vc標準曲線;原子吸收光譜法測自來水中的鈣含量

        第五講  色譜分析法

        教學內容:色譜法簡介,色譜法分類,氣相色譜分離過程,氣相色譜常用術語(色譜峰、基線、色譜峰高、半高峰寬,色譜峰底寬,保留時間(保留體積)、死時間(死體積)、調整保留時間(調整保留體積)、相對保留值。氣相色譜理論基礎:塔板理論,分配系數和分配比,速率理論,分離度。氣相色譜法:氣相色譜法特點,氣相色譜儀(氣路系統、進樣系統、分離系統、穩定空中系統、監測記錄系統),熱導池檢測器,氫火焰離子檢測器,電子捕獲檢測器,火焰光度檢測器,氣相色譜流動相,固體固定相,載體,固定液,氣相色譜定性分析(保留值與已知物對照定性、保留值經驗規律定性、根據文獻保留數據定性),氣相色譜定量分析(定量校正因子、歸一化法、內標法、標準曲線法)。氣相色譜條件的選擇:固定相的選擇,柱長和柱徑的選擇,載氣及其流速的選擇,柱溫的選擇,進樣條件的選擇,檢測器的選擇。高效液相色譜的特點,儀器結構(高壓輸液系統、進樣系統、分離系統、檢測系統、數據處理與記錄系統),高效液相色譜的固定相和流動相及其選擇,檢測器的類型(紫外檢測器、熒光檢測器、示差折光檢測器),常見的色譜類型(分配色譜、液固色譜、離子交換色譜、尺寸排斥色譜和親和色譜),色譜分離方式的選擇。

        教學重點和難點:色譜流出曲線及有關術語,分離度的概念和意義,定性和定量分析方法。氣相色譜儀的結構,氣相色譜固定相及其選擇,氣相色譜分離條件的選擇,氣相色譜分析方法的應用。高效液相色譜儀的結構,流動相選擇的條件,分配色譜、液固色譜、離子交換色譜、尺寸排斥色譜和親和色譜的原理。

        建議教學方法:多媒體教學與課堂分組討論

        思考題:

        1、色譜流出曲線的定義、有關參數及獲得的信息。

        2、色譜定性、定量分析的方法。

        3、氣相色譜儀的基本設備包括那幾部分,各有什么作用?

        4、對載體和固定液的要求及如何選擇固定液?

        5、色譜分離操作條件的選擇?

        6、高效液相色譜儀的組成?對流動相的具體要求?

        7、高效液相色譜中的梯度洗脫與氣相色譜中的程序升溫有何異同?

        8、高效液相色譜法常見的主要類型及其選擇?

        需開設的實驗項目:抗壞血酸的高效液相色譜分析;氣相色譜分離效能指標測量

        第六講 質譜法

        教學內容:質譜儀的工作原理、質譜儀的主要部件(高真空系統、進樣系統、離子源、質量分離器、離子檢測器)。離子的主要類型:分子離子峰、同位素離子峰、碎片離子峰、亞穩離子峰、重排離子峰。有機化合物的質譜:電子轉移符號、有機化合物的斷裂方式、有機化合物的質譜、有機化合物質譜的圖譜解析。

        教學重點和難點:離子源的基本原理、特點及適應性,質量分析器的基本結構、分析原理、特點及適用性;有機化合物質譜圖譜的解析。

        建議教學方法:多媒體教學與演示

        思考題:

        1、質譜儀由哪幾部分組成?各部分的作用是什么?

        2、離子源的作用是什么?試述幾種常見離子源的原理及優缺點。

        3、在質譜分析中,較常遇到的離子斷裂方式有哪幾種?

        需開設的實驗項目:離子阱液質聯用儀的結構及使用

        (二)課程實驗教學

        現代儀器分析實驗 (18學時)

        序號

        實驗名稱

        學時

        必開

        選開

        實驗類型

        內容提要

        驗證

        基本

        操作

        綜合

        設計

        1

        離心機的結構及使用

        2

         

         

         

         

        本實驗主要介紹離心機的結構;離心機使用中溫度、轉速、時間的設定,轉子的更換及維護;離心機使用時的注意事項。

        2

        紫外分光光度法繪制Vc標準曲線

        3

         

         

         

         

        本實驗利用S3100全掃描紫外分光光度計對維生素C溶液進行掃描,獲得Vc標準光譜圖;然后配制5個濃度的Vc標準溶液,逐一測定,從而獲得Vc的標準曲線。

        3

        電鏡的結構、制樣技術及操作(錄像片)

        3

         

         

         

         

        本教學片主要介紹透射電鏡和掃描電鏡的結構;超薄切片技術、負染色技術、臨界點干燥技術等電鏡制樣技術;透射電鏡和掃描電鏡的操作步驟。

        4

        抗壞血酸的高效液相色譜分析

        3

         

         

         

         

        本實驗采用反相高效液相色譜,以C18為色譜柱,0.5%磷酸二氫鉀溶液為流動相,流速1ml/min,紫外檢測器在243nm波長下對水果中的抗壞血酸的含量進行測定。

        5

        高效液相色譜測定維生素B2片中VB2的含量

        3

         

         

         

         

        本實驗采用反相高效液相色譜,以C18為色譜柱,甲醇:水=45:55為流動相,流速1ml/min,熒光檢測器,激發波長449nm;發射波長527nm,對生素B2片中VB2含量進行測定。

        6

        氣相色譜分離效能指標測量

        3

         

         

         

         

        本實驗采用氣相色譜,DB-23毛細管柱,載氣為高純氮氣,氫焰檢測器,分別在不同柱溫下測定甲醇、乙醇的分離度,并計算在最佳柱溫下的理論塔板數,進一步理解氣相色譜的分離效能。

        7

        離子阱液質聯用儀的結構及使用

        2

         

         

         

         

        本實驗首先對離子阱液質聯用儀的結構、原理及在蛋白質組學中的應用進行介紹;然后對儀器的操作步驟及注意事項進行介紹。

        8

        紫外分光光度法測定雙組分混合物

        3

         

         

         

         

        本實驗利用紫外-可見分光光度計對吸收曲線相互重疊的二元混合物,通過解聯立方程組的方法進行同時測定。

        9

        原子吸收光譜法測自來水中的鈣含量

        3

         

         

         

         

        本實驗主要介紹原子吸收光譜法的基本原理;通過對自來水中鈣的測定,理解原子吸收分光光度計構造及各部件的作用;掌握原子吸收光譜標準加入法及其特點。實驗內容: 準備鈣的標準溶液和自來水試樣; 用標準溶液加入法測定自來水中鈣的含量。

        四、實驗報告的格式

        實驗報告的撰寫要求使用專用實驗報告紙。實驗報告的內容應包括:實驗目的、實驗的基本原理、實驗用的儀器設備及試劑、實驗操作程序、實驗結果與分析、實驗應注意事項及問題討論。

        五、本課程考核方式、方法

        課程考核采用閉卷和平時測驗相結合的方式進行。學生平時課堂考勤和提問情況,作為平時成績納入本課程最終成績。

        附:教學參考參考書目

        1.教材

        [1] 《現代儀器分析》劉約權主編,高等教育出版社,2004

        2.參考書

        [1] 儀器分析方惠群、于俊生、史堅編著,科學出版社,2002。

        [2] 儀器分析朱明華編,高等教育出版社,2001.9。

        [3] 《儀器分析實驗指導》山東農業大學主編,1996。

        [4]  《現代儀器分析實驗與技術》陳培榕、鄧勃等編,清華大學出版社,1999.12。。

        [5] 《儀器分析實驗》趙文寬、張悟銘、王長發、周性堯等編,高等教育出版社,1997.7。

        [6] 《電鏡在農業上的應用》,冷梅等,山東農業大學自編講義,198710月。

        [7] 《電子顯微鏡的原理和使用》,朱宜等,北京大學出版社,1983年。

        [8] 《電子顯微鏡》,朱祖福等,機械工業出版社,1984年(3)。

         

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